ESTREPTOCOCOS OXIDASA

Objetivo:

Detectar en el microorganismo estudiado el enzima citocromo oxidasa

Fundamento:

Se detecta oxidasa en los microorganismos aerobios o anaerobios facultativos. Los anaerobios estrictos carecen de ella.

Se determina a través de esta prueba la presencia o ausencia de citocromo oxidasa en el microorganismo, el cual cataliza el último paso de la transferencia de electrones desde un sustrato orgánico (azúcares, polipéptidos…) al oxígeno.

Para ello se observará el cambio de color de un indicador de pH incoloro cuando está reducido y coloreado cuando se oxida.

Entre los indicadores más utilizados se encuentra la p-fenilendiamina, que por acción del enzima citocromo oxidasa da un compuesto químico indofenol que contiene color.

Material:

·  Pipeta pasteur

·  Placa de Petri o portaobjetos

·  Asa de siembra

·  Mechero

·  Papel de filtro

Reactivos:

·  Placa de Petri con medio apropiado para el microorganismo (Ver técnica)

·  Reactivo oxidasa de Kovacs

Procedimiento:

·  Se cultiva en una placa de Petri con agar sangre el microorganismo problema. Se puede utilizar otro medio que sea más conveniente para el crecimiento del microorganismo investigado. Los medios que contengan glucosa pueden inducir a falsos resultados negativos debido a que la fermentación de la glucosa inhibe la actividad de la oxidasa

·  Sobre una placa de Petri o portaobjetos se coloca un trozo de papel de filtro sobre el que dejamos caer 2 ó 3 gotas de reactivo de Kovacs. La tira de papel de filtro impregnada con reactivo puede ser sustituido por discos comerciales ya preparados que antes de utilizarlos deben rehidratarse con unas gotas de agua destilada.

·  Se toma una colonia con el asa de siembra y se extiende en el papel.

·  El resultado se lee en 5-10 segundos.

·  Se puede realizar esta técnica de otra manera. Añadiendo directamente el reactivo oxidasa de Kovacs sobre las colonias de la placa de Petri con agar sangre. Si son oxidasa positivos toman un color marrón y enseguida pasan a negro parduzco.


·  Oxidasa -: No se produce color.