ESTREPTOCOCO PRUEBA DE LA BACITRACINA

ESTREPTOCOCOS OXIDASA

Objetivo:

Detectar en el microorganismo estudiado el enzima citocromo oxidasa

Fundamento:

Se detecta oxidasa en los microorganismos aerobios o anaerobios facultativos. Los anaerobios estrictos carecen de ella.

Se determina a través de esta prueba la presencia o ausencia de citocromo oxidasa en el microorganismo, el cual cataliza el último paso de la transferencia de electrones desde un sustrato orgánico (azúcares, polipéptidos…) al oxígeno.

Para ello se observará el cambio de color de un indicador de pH incoloro cuando está reducido y coloreado cuando se oxida.

Entre los indicadores más utilizados se encuentra la p-fenilendiamina, que por acción del enzima citocromo oxidasa da un compuesto químico indofenol que contiene color.

Material:

·  Pipeta pasteur

·  Placa de Petri o portaobjetos

·  Asa de siembra

·  Mechero

·  Papel de filtro

Reactivos:

·  Placa de Petri con medio apropiado para el microorganismo (Ver técnica)

·  Reactivo oxidasa de Kovacs

Procedimiento:

·  Se cultiva en una placa de Petri con agar sangre el microorganismo problema. Se puede utilizar otro medio que sea más conveniente para el crecimiento del microorganismo investigado. Los medios que contengan glucosa pueden inducir a falsos resultados negativos debido a que la fermentación de la glucosa inhibe la actividad de la oxidasa

·  Sobre una placa de Petri o portaobjetos se coloca un trozo de papel de filtro sobre el que dejamos caer 2 ó 3 gotas de reactivo de Kovacs. La tira de papel de filtro impregnada con reactivo puede ser sustituido por discos comerciales ya preparados que antes de utilizarlos deben rehidratarse con unas gotas de agua destilada.

·  Se toma una colonia con el asa de siembra y se extiende en el papel.

·  El resultado se lee en 5-10 segundos.

·  Se puede realizar esta técnica de otra manera. Añadiendo directamente el reactivo oxidasa de Kovacs sobre las colonias de la placa de Petri con agar sangre. Si son oxidasa positivos toman un color marrón y enseguida pasan a negro parduzco.


·  Oxidasa -: No se produce color.

ESTREPTOCOCOS

ESTUDIO DE ESTREPTOCOCOS

Objetivos:

1. Interpretar los resultados de pruebas de identificación de microorganismos
2. Identificar especies de estreptococos

Materiales:

• Cultivos de microorganismo
• Portaobjetos
• Asas de siembra
• Medios de cultivo: Manitol, Agar Sangre, Sgar ADNasa,…
• Discos de bacitracina
• Bilis esculina

Procedimiento:

• Aislar st.fecalis y st.pyogenes.
• Sembrar en la misma placa los dos microorganismos, mediante una estría simple. Para saber si son hemolíticas o no ( meterlo en estufa 24h a 37C).
• Con un asa de siembra recoger unos pocos microorganismos y someterlos a la tincion de Gram. (una tincion para st.pyogenes y otra para st.fecalis)

FOTOOOOS GRAAAM

diplococos morados

1 ESTUDIO DE ESTAFILOCOCOS

UNIDAD DIDÁCTICA 4: TÉCNICAS DE AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN BACTERIANA

ESTUDIO DE ESTAFILOCOCOS

Objetivos:

1. Interpretar los resultados de pruebas de identificación de microorganismos
2. Identificar especies de estafilococos

Materiales:

• Cultivos de microorganismo
• Portaobjetos
• Asas de siembra
• Medios de cultivo: Manitol, Agar Sangre, Sgar ADNasa,…
• Discos de novobiocina
• Plasma de conejo

Procedimiento:

A partir de los cultivos puros:

• Hacer una tinción de Gram e inocular en Agar Manitol sal
• Realizar las pruebas de identificación de los estafilococos.

7 PRUEBA DEL MANITOL

PRUEBA DEL MANITOL

Sirve para detectar presencia de Staphylococcus, en este caso, S. Aureus.

Objetivo:

Determinar la capacidad de un organismo de fermentar manitol (carbohidrato) incorporado a  un medio.

Medio de cultivo:

Se utiliza Manitol Salt Agar.

Procedimiento:

Sembrar con una torunda que anteriormente lo hemos cogido de la zona del nasofaríngeo de cada uno/a. De esta forma, podemos identificar quien es portador de S. Aureus, porque este fermenta manitol y cambia de color.

Después, con la torunda se estría en una parte de la placa, y para terminar con un asa de siembra se hace una estría múltiple por toda la placa.

Inoculación:

Incubar a 35-37ºC durante 24h.

Interpretación de los resultados:

La fermentación  del manitol  hace cambiar de color al indicador Rojo de fenol a amarillo indicando la acidificación del medio. Por lo tanto S. aureus da resultado positivo ( imagen de la derecha). Mientras que, en la placa de la izquierda no ha fermentado nada, por esa razón no ha habido cambio de color.